Depuis plusieurs années nous produisons avec les étudiants de la phosphatase alcaline en bioréacteur de 2 litres et en erlen.
La souche bactérienne a changé souvent, mais nous sommes restés dans les souches dédiées à l'enseignement des travaux pratiques.
Les étudiants doivent ensuite réaliser une extraction de l'enzyme par différentes techniques de centrifugation dans des milieux différents. Le principe est basé sur le fait que l'enzyme se trouve dans le périplasme de la bactérie.
En mars 2016, des étudiants sont arrivés à maitriser et à doser la phosphatase alcaline par HPLC. Ils ont analysés quelques années de production.
Ci joint document de travail de mes étudiants que je remercie. C'est un un travail délicat qui a permis de travailler sur une colonne de type C4...
Ce protocole présente l'intéret de travailler sur l'étalonnage d'une colonne et la détermination de la masse apparente d'une proteine. Toujours en lien avec la phosphatase alcaline.